前 言
非洲猪瘟（African swine fever， ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus， ASFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病，发病率和死亡率可达100%。世界动物卫生组织（OIE）将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。
非洲猪瘟病毒不感染人，该病不是人畜共患病，无公共健康危害。但是，由于目前尚无有效的疫苗和治疗方法，任其流行会给养猪业带来巨大经济损失和造成严重的社会影响，并冲击畜产品国际贸易。我国是世界第一养猪大国，饲养量占世界总量的50%左右，切实做好非洲猪瘟防控工作，事关我国养猪业持续健康发展，意义重大。
本手册面向从事非洲猪瘟现场排查的一线防疫人员，提供了简明实用的相关操作技术与方法，为非洲猪瘟现场排查等相关工作提供参考。
一、非洲猪瘟现场排查流程
二、准备工作
1、人员准备
□ 了解非洲猪瘟基本知识（基本的生物学特征、流行病学特点、临床表现、剖检病理变化等）。
□ 了解非洲猪瘟感染与传播的高风险因素（饲喂泔水、生物安全水平低、动物贩运、猪肉及其制品流通）。
□ 了解排查工作中需遵守的生物安全操作要求，避免人为造成的传播。
□ 养殖户等相关人员可能面临较大压力，应注意工作方式方法。
2、车辆准备
□ 车辆必须彻底清洗消毒。
□ 车辆不携带无关物品。
□ 在车内、车的后备箱里铺塑料布防止污染。
3、物品准备（生物安全防护及采样所需物品）
排查采样物品清单：
（1）进场所需材料清单
（２）采样所需材料清单
一般材料
□ 标签和记号笔；
□ 数据记录表、笔、写字板；
□ 盛放针头和刀片的锐器盒；
□ 高压灭菌袋；
□ 用于环境采样的拭子和盛放拭子用的离心管；
样品包装运输所需材料
□ 容器 / 离心管 / 小瓶 ( 防漏并标示清楚)；
□ 吸水纸；
□ 密封性好的容器或袋子，作为二次包装( 即防漏)、用于储存动物样品的容器和采血管；
□ 冷藏箱 (+4℃ )；
□ 便携式 -80℃冷冻箱 / 干冰 / 液氮罐( 仅在远离设备齐全的实验室进行取样时才需要)；
□ 保定动物的材料 ( 如，套索、木板)；
采血所需材料
□ 消毒剂和脱脂棉（酒精棉）；
□ 不 含 抗 凝 剂 的 无 菌 采 血 管(10ml)( 红色盖子)；
□ 含有EDTA的无菌采血管(10ml)( 紫色盖子)；
□ 根据猪的大小和采样部位 ( 颈静脉、耳缘静脉) 选取真空采血管或10-20ml 注射器；
组织采样所需材料
□ 样品架或冻存盒，装有足量冰 /冰袋的冰盒；
□ 用于收集病料的 2ml 无菌冻存管( 采完的样品放在冰上) 或小号密封袋；
□ 带刀片的手术刀、镊子和剪刀；
□ 盛有消毒剂的容器，用于对刀、剪刀进行消毒，避免不同脏器和不同动物个体之间的交叉污染；
□ 如进行病理学检查，可使用密封的塑料容器，内装10% 中性福尔马林缓冲液( 动物脏器体积: 福尔马林体积比为1:10)；
□ 处置动物尸体所需的适当材料。
三、进出养殖场要求
1、 抵达养殖场
□ 车辆停在养殖场入口附近，不得驶进场内。
□ 在养殖场指定的地点（清洁区），穿戴个人防护设备（如需要，应遵循养殖场的要求进行个人防护），并进行物资的准备、制备消毒剂等。
□ 进入养殖场生产区域前，脱下和摘掉不必要的衣服和物品 ( 夹克、领带、手表等)，清空衣服口袋，按照养殖场进场程序（沐浴洗澡或其他方式）进入生产区域。
□ 电子设备 ( 移动电话等 ) 应放置在密封的塑料袋中，以便随后进行清洁和消毒。在养殖场内，只能通过塑料袋使用手机，不要从袋子里拿出。
□ 其他非一次性物品，应在消毒后进场。如需要，应按照养殖场物资进场程序进行消毒后进场。
□ 消毒工作要在清洁干燥的地面进行（最好是混凝土地面），应划分清洁和非清洁区并保证界线清晰。
2、 穿戴个人防护设备( 在清洁区)
□ 脱下鞋子，并放在塑料布上。
□ 在遵守养殖场进场要求的前提下，部分场需要脱去全部个人衣服，洗澡后穿戴养殖场内部衣服方可进场。
□ 部分场可以首先穿戴一次性防护服，穿上靴子。戴手套，手套要用胶带封上。
□ 如果需要穿防水服，防水服应套在靴子外层。再戴一层手套，方便中间更换。
□ 靴套至少覆盖胶鞋底部和下部。
□ 进场前，戴口罩并仔细检查物品清单。
3、 离场前准备
□ 在非清洁区域对接触过养殖场的所有物品进行清洗和消毒处理。
□ 对盛放样品容器的表面进行消毒，然后放在清洁区。
□ 脱下鞋套放入非清洁区的垃圾袋中，然后彻底擦洗靴子 ( 特别是鞋底)。
□ 脱下手套并放入非清洁区的垃圾袋中。
□ 脱下一次性防护服并放入非清洁区的垃圾袋中。
□ 脱下靴子，对靴子进行消毒后放入清洁的袋子里。
□ 手和眼镜也必须进行消毒，并用消毒湿巾清洁脸部。
□ 进入生产区域的人员在指定区域进行沐浴洗澡更衣后方可离开。
□ 非一次性物品（胶靴等）和盛放样品的容器用双层袋盛放并胶带封装。可穿回日常的鞋子。
□ 携带出养殖场的袋子需放在车辆内预先铺好的塑料布上。
□ 进入生产区域的人员在指定区域进行沐浴洗澡更衣后方可离开。
□ 接触过样品或潜在污染的车辆进行重点清洗消毒。
□ 在离开可能受到污染的区域之前，清洁和消毒汽车的轮胎和表面。清除所有可见的污垢。不要忘记清理隐藏的区域，如车轮拱、轮胎板和汽车底部。清除所有污垢后，用消毒剂喷洒表面。
□ 处理车内所有垃圾并清理所有污垢 ( 应妥善处理垃圾 )。
□ 用浸有消毒剂的布擦拭方向盘、变速杆、踏板、手闸等。
4、 离场后
□ 如家中没有饲养生猪，可以回家淋浴并彻底清洗头发。将当天所穿衣服浸泡在消毒剂中30 分钟；如果家中饲养生猪，应在其他地方进行清洗。
□ 如果进入了疑似感染场，确诊前不应前往任何饲养生猪的场所。如果确认该场感染了非洲猪瘟，三天内不应前往任何有猪的场所。
□ 再次对汽车内部和外部进行消毒。清除汽车上的所有塑料布，并妥善处理。
5、消毒剂的选择
非洲猪瘟病毒对热的抵抗力较弱，一般的消毒措施都可以将病毒杀灭，但是在感染病猪组织以及在低温的条件下病毒存活时间可达6个月以上乃至数年。
□ 最有效的消毒剂是去污剂、次氯酸盐、碱类及戊二醛。
□ 8/1000的氢氧化钠（30 分钟）、次氯酸盐-2.3％氯（30 分钟）、3/1000 福尔马林（30 分钟）、3％邻苯基苯酚（30 分钟）可灭活病毒。
□ 碱类（氢氧化钠、氢氧化钾等）、氯化物和酚化合物适用于建筑物、木质结构、水泥表面、车辆和相关设施设备消毒，酒精和碘化物适用于人员消毒。
□ 不易消毒的设备放置在阳光下暴晒消毒。
四、临床排查
非洲猪瘟病猪主要临床表现差异较大，不易识别，但通常有以下几种或全部典型症状，包括高热、呕吐、腹泻或便秘，有的便血，虚弱、难以站立，体表不同部位（尤其是耳、鼻、腹部、臀部）皮肤呈红色、紫色或蓝色，有的咳嗽、呼吸困难，母猪流产、产死胎或弱胎。出现上述临床症状后，一般2-10 天内死亡。剖检可见内脏多个器官组织出血，脾脏显著肿大，颜色变暗，质地变脆。部分首次发生非洲猪瘟的养殖场，猪群发病非常急，最急性型不表现任何症状而突然死亡，无特征性剖检病变。
1、 流行病学
□ 传染源：带非洲猪瘟病毒野猪和发病家猪的分泌物及排泄物、含有病死猪组织或非洲猪瘟病毒污染的泔水、含非洲猪瘟病毒的猪肉及其制品，以及钝缘软蜱。
□ 传播途径：感染猪与健康易感猪的直接接触可传播非洲猪瘟病毒。非洲猪瘟病毒可通过饲喂污染的泔水、污染的饲料、垫草、车辆、设备、衣物等间接传播。可经钝缘软蜱叮咬生猪传播。消化道和呼吸道是最主要的感染途径。
□ 易感动物：家猪和野猪。其它哺乳动物包括人类均不感染非洲猪瘟病毒。目前报道的发病猪群主要是饲喂非洲猪瘟病毒污染泔水的猪。不同品种、日龄和性别的猪均对非洲猪瘟病毒易感。
□ 潜伏期：家猪为 4 天到 19 天不等。
2、临床表现
非洲猪瘟的特征通常是猪突然死亡、死前呈现体温升高、剖检可见多脏器出血。但临床上可能有多种表现：从感染7 天之内急性死亡，到持续几周或几个月的慢性感染不等（图2）。
主要临床症状：
□ 无症状突然死亡；
□ 发病率、病死率高；
□ 高热，体温升高 40.5 至 42℃；
□ 耳、四肢、腹背部皮肤有出血点、发绀；
□ 呕吐，腹泻或便秘，粪便带血；
□ 虚弱、步态僵直，不愿站立等；
□ 偶见眼、鼻有黏液脓性分泌物。
其他临床症状：
□ 精神沉郁、食欲下降；
□ 呼吸困难，湿咳；
□ 关节疼痛、肿胀；
□ 妊娠母猪流产、死胎、弱仔。
3、剖检变化
最明显的剖检病变是:
□ 脾脏显著肿大，一般情况下是正常脾的 3-6 倍，颜色变暗，质地变脆；
□ 淋巴结 ( 特别是胃肠和肾 ) 增大、水肿以及整个淋巴结出血，形态类似于血块；
□ 肾脏表面瘀点 ( 斑点状出血 )（图 3）。
剖检变化还可能包括：
□ 皮下出血；
□ 心包积液和体腔积水、腹水；
□ 心脏表面 ( 心外膜 )、膀胱和肾脏 ( 皮质和肾盂 )的出血点；
□ 肺可能出现充血和瘀点，气管和支气管有泡沫，严重肺泡和间质性肺水肿；
□ 瘀点、瘀斑 ( 较大的出血 )，胃、小肠和大肠中过量的凝血；
□ 肝充血和胆囊出血。
4、发现疑似病例的情况下应立即采取的行动
发现疑似病例，应立即按照《非洲猪瘟疫情应急预案》要求上报疫情（见附件）。
五、样品采集、包装与运输
1、 采样方法
全血
□ 采血过程中应保持无菌操作。
□ 采血前，先用酒精棉对采血部位进行局部消毒。
□ 采血完毕，进行局部消毒并用干棉球按压止血。
□ 使用含有抗凝血剂（EDTA-紫色盖）的真空采血管从颈静脉、前腔静脉或耳缘静脉抽取全血。
□ 如果动物已经死亡，可立即从心脏中采血。避免使用含肝素的真空采血管（绿色盖子）。
血清
□ 使用未加抗凝剂（红色盖子）的真空采血管从颈静脉、前腔静脉、耳缘静脉采血，或剖检过程收集血液样品。
□ 静置分离后，收集血清。如果血清是红色，这表明样品发生了溶血。通常已经死亡动物的血液样品易发生溶血。
□ 血清样品在分离后可以立即开展检测，如果需要储存，对于抗体检测，储存在-20℃，但是对于病毒检测，最好储存于-80℃。
器官和组织样品
□ 可采集脾脏、淋巴结、肝脏、扁桃体、心脏、肺和肾脏样品。脾脏和淋巴结的病毒含量最高。
□ 对于死亡时间较长的动物，可采集骨髓样品，也可采集关节内组织液。
□ 建议将样品保持在4℃，尽快提交给实验室。如无法及时送样，可将样品储存在冷库或液氮中。
□ 样品用10%缓冲福尔马林浸泡30分钟以上，病毒可被灭活，可用于PCR 检测。
□ 样品的最小需求量：血清 1mL；全血 1mL；组织样品 10g。
环境样品
□ 可多点采集养殖场环境拭子，如粪便、泔水、饲料等。
□ 建议样品 4℃以下保存。
2、样品的记录、保存、包装和运送
□ 为保证准确诊断，必须在适当温度下、以最快速度，将样品仔细包装、做好标记和相关记录，以最快路线送到最近的农业农村部指定的实验室。
□ 采样之前必须致电相关实验室，确保遵循正确的样品提交程序，保证所送样品能在第一时间完成检测及储存。
□ 做好样品运输过程中的安全保障工作，避免在运输途中感染其他动物，避免样品被污染。
□ 运送的样品必须附有足够数量的冷却材料（如冰袋），以防变质。
采样信息记录
□ 采样同时，应填写采样单。
□ 采样单应用钢笔或签字笔逐项填写（一式三份）。
□ 样品标签和封条应用签字笔填写。
□ 保温容器外封条应用钢笔或签字笔填写。
□ 小塑料离心管上可用记号笔做标记。
□ 应将采样单和病史资料装在塑料包装袋中，并随样品送实验室，每个样品应能对应到来源动物。
样品信息至少应包括以下内容：
□ 畜主姓名和养殖场地址；
□ 养殖场饲养动物品种及数量；
□ 疑似或被感染动物或易感动物种类及数量；
□ 首发病例和继发病例的日期；
□ 感染动物在畜群中的分布情况；
□ 死亡动物数、出现临床症状的动物数量及年龄；
□ 临床症状及其持续时间，死亡情况和时间等；
□ 饲养类型和标准，包括饲料来源等；
□ 送检样品清单和说明，包括病料种类、保存方法等；
□ 动物免疫和治疗史；
□ 送检者的姓名、地址、邮编、电话和邮箱；
□ 送检日期；
□ 采样人和被采样单位签章。
样品包装要求
推荐样品使用“三重包装系统”，并正确标记，以防止泄漏，内附采样单。
□ 直接盛装容器。样品应该储存在密封、无菌的主容器中，根据检验样品性状及检验目的选择不同的容器，如图4 所示。每个样品容器外应做好标记，注明样品名、样品编号、采样日期等，要能明确识别来自于哪只动物。
□ 二次包装。吸收材料也应放置在二次容器内。如果将多个易碎的主容器放置在单个二次容器中，则必须单独包装或分离，以防止相互接触。二次包装容器应贴封条，封条上应有采样人签章，并注明贴封日期，标注放置方向。
□ 坚硬的外部包装。外包装在盛装液体的情况下不得超过4升，在固体物质的情况下不得超过4 公斤（不包括冰的重量）。样品必须保持4℃温度或更低温度，并就近送动物疫病预防控制机构进行保存。注意：切勿冻结全血或混合有血凝块的血清。
□ 外包装标签和标记：
√ "B 类感染物质 " 标签，其正确的运输名称旁边标注 "B 类感染物质"；
√ 采样负责人的全名、地址和电话号码；
√ 实验室联系人的全名、地址和电话号码；
√ 标签上标明“在4℃”、“在-20℃”或“在-80℃”保存；
六、附件（点击链接）
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