近日，农业农村部发布第513号和523号公告，共制定了禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗等8种兽药产品制造及检验试行规程、质量标准等。
与现有的疫苗相比，变化比较大。事隔上一次变更新毒株，相隔18个月，时间越来越短，禽流感病毒变异的速度仍然很快。
中华人民共和国农业农村部公告 第513号
根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，我部组织制定了重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株）等7种兽药产品工艺规程、质量标准、说明书和内包装标签，现予发布，自发布之日起执行。
特此公告。
附件：1. 兽药产品目录
2. 工艺规程
3. 质量标准
4. 说明书和内包装标签
农业农村部
2022年1月2日
附件1
根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，我部组织制定了重组禽流感病毒（H5＋H7）三价灭活疫苗（H5N2 rHN5801株+rGD59株，H7N9 rHN7903株）的工艺规程、质量标准、说明书和内包装标签，现予发布，自发布之日起执行。
直接点击查看：目前国内禽流感H5疫苗品种和厂家汇总（2021年版）
附件
1、重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株）说明书
【兽药名称】
通用名 重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株）
商品名 无
英文名 Reassortant Avian Influenza Virus（H5+H7）Trivalent Vaccine，Inactivated（H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14+H7N9 Strain H7–Re4）
汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu （H5+H7） Sanjia Miehuoyimiao （H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu+H7N9 H7–Re4 Zhu）
【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株、H5N8亚型H5–Re14株和H7N9亚型H7–Re4株。灭活前其HA效价均为1∶512。
【性状】 乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支、2.3.4.4b分支和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力，鸡免疫期为6个月；鸭、鹅首免后3周，加强接种1次，免疫期为4个月。
【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2～5周龄鸡，每只0.3ml；5周龄以上鸡，每只0.5ml。2～5周龄鸭和鹅，每只0.5ml；5周龄以上鸭和鹅，每只1.0ml。
【不良反应】 一般无可见的不良反应。
【注意事项】 （1）禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。
（2）本品严禁冻结。
（3）本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象，切勿使用。
（4）使用前应将疫苗恢复至常温，并充分摇匀。
（5）接种时应使用灭菌器械，及时更换针头，最好1只禽1个针头。
（6）疫苗启封后，限当日用完。
（7）屠宰前28日内禁止使用。
（8）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】
【包装】
【贮藏与有效期】 2℃～8℃保存，有效期为12个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅在兽医指导下使用
2、重组禽流感病毒（H5亚型）二价灭活疫苗（H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株）说明书
【兽药名称】
通用名 重组禽流感病毒（H5亚型）二价灭活疫苗（H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株）
商品名 无
英文名 Reassortant Avian Influenza Virus （H5 Subtype） Bivalent Vaccine，Inactivated（H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14）
汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu （H5 Yaxing） Erjia Miehuoyimiao （H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu）
【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株和H5N8亚型H5–Re14株，灭活前HA效价均为1∶256。
【性状】 乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支和2.3.4.4b分支禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力，鸡免疫期为6个月；鸭、鹅首免后3周，加强接种1次，免疫期为4个月。
【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2～5周龄鸡，每只0.3ml；5周龄以上鸡，每只0.5ml。2～5周龄鸭和鹅，每只0.5ml；5周龄以上鸭和鹅，每只1.0ml。
【不良反应】 一般无可见的不良反应。
【注意事项】 （1）禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。
（2）本品严禁冻结。
（3）本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象，切勿使用。
（4）使用前应将疫苗恢复至常温，并充分摇匀。
（5）接种时应使用灭菌器械，及时更换针头，最好1只禽1个针头。
（6）疫苗启封后，限当日用完。
（7）屠宰前28日内禁止使用。
（8）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】
【包装】
【贮藏与有效期】 2℃～8℃保存，有效期为12个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅在兽医指导下使用
3、禽流感病毒H5亚型（H5–Re13株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书
【兽药名称】
通用名 禽流感病毒H5亚型（H5–Re13株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
商品名 无
英文名 Avian Influenza Virus（H5 Subtype, Strain H5–Re13）Hemagglutination Inhibition Test Antigen, Positive Sera and Negative Sera
汉语拼音 Qinliuganbingdu H5 Yaxing （H5–Re13 zhu）Xueningyizhishiyan Kangyuan,Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
【主要成分与含量】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒（H5–Re13株），血凝（HA）效价不低于1∶128。测定鸡血清时，分别使用禽流感病毒H5亚型（H5–Re13株）鸡阳性血清和禽流感病毒HI试验鸡阴性血清作为对照血清，阳性血清血凝抑制（HI）抗体效价不低于1∶128，阴性血清HI抗体效价不高于1∶4。测定鸭和鹅血清时，分别使用禽流感病毒H5亚型（H5–Re13株）鸭阳性血清和禽流感病毒HI试验鸭阴性血清作为对照血清，处理后的鸭阳性血清HI抗体效价不低于1∶80，阴性血清HI抗体效价低于1∶10。
【性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块；阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易于与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于HI试验检测禽流感病毒H5亚型（H5–Re13株）抗体。
【用法与判定】
1 材料
1.1 96孔V型（90度）微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.0~7.2 0.01mol/L PBS 按照如下方法配制或购买商品化产品，PBS一经使用，于2℃～8℃保存不超过3周。PBS 配制方法：秤量NaCl 80g、KCl 2g 、十二水磷酸氢二钠 36.3g、磷酸二氢钾 2.4g，溶解于ddH2O中，并定容10L，用氢氧化钠或盐酸调pH至7.0~7.2，最后121℃灭菌30分钟或过滤后使用。
1.3 阿氏（Alsevers）液 称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2℃～8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液 采取2~4只 2~6月龄SPF鸡的血液，与等量阿氏液混合，然后用PBS（0.01mol/L，pH值7.0~7.2，下同）洗涤3~4次，每次以1500r/min离心5~10分钟，将沉积的红细胞用PBS配制成1%悬液。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签规格标注的量，用PBS溶解。
2 操作术式
2.1 血凝（HA）试验
2.1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原，反复抽打3～5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行2倍系列稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025ml弃去。
2.1.4 每孔加0.025ml PBS。
2.1.5 每孔加入0.025ml 1%（V/V）鸡红细胞悬液。
2.1.6 结果判定 将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，置室温20~30分钟或置2~8℃ 45~60分钟，当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时，将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌（100%凝集）的最高稀释倍数判为血凝效价。
2.2 血凝抑制（HI）试验
2.2.1 根据HA试验测定的效价，如果抗原凝集价测定结果为1∶1024（举例），4个血凝单位（即4 HAU）=1024/4=256（即1∶256）。取PBS 9.0ml，加抗原 1.0ml，即成1∶10稀释，将1∶10稀释液 1.0ml加入到 24.6 ml PBS中，使最终浓度为1∶256。
2.2.2 四个单位血凝单位检测 检查4 HAU的血凝价是否准确，应将配制的1∶256稀释液进行系列稀释，使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。然后，从每一稀释度中取0.025ml，加入PBS 0.025ml，再加入1%鸡红细胞悬液0.025ml，混匀。
将血凝板置室温20~40分钟或置2~8℃ 40~60分钟，如果配制的抗原液为4 HAU，则1∶4稀释度将给出凝集终点；如果4 HAU高于4个单位，可能1∶5或1∶6为终点；如果较低，可能1∶2或1∶3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整，使工作液确为4 HAU。
2.2.3 第2～11孔加入0.025ml PBS，第12孔加入0.05ml PBS。
2.2.4 第1~2孔加入0.025ml血清，第2孔血清与PBS充分混匀后吸0.025ml于第3孔，依次2倍系列稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025ml弃去。
2.2.5 第1～11孔均加入0.025ml的4HAU抗原，在室温（20～25℃）下静置至少20分钟或2℃～8℃ 至少60分钟。
2.2.6 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温（20～25℃）下静置20～40分钟或2℃～8℃ 40～60分钟，对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI抗体效价。当阳性对照血清的HI抗体效价与已知抗体效价误差不超过1个滴度，鸡阴性对照血清抗体效价不高于1∶4（若用处理后的鸭阴性血清，则抗体效价应低于1∶10）时，试验方可成立。检测鸡血清时，被检血清HI抗体效价不高于1∶8判为阴性，不低于1∶16判为阳性；检测处理后的鸭和鹅血清时，被检血清HI抗体效价低于1∶10判为阴性，不低于1∶10判为阳性。
【注意事项】 （1）HA和HI试验影响因素甚多，应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。
（2）准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。
（3）用pH值7.0～7.2的PBS（0.01mol/L）作为稀释液。
（4）抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。
（5）准确配制4HAU抗原，使用前需进行滴定，滴定好的抗原应在2小时内用完。
（6）抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2℃～8℃保存不超过1个月。
（7）同一亚型不同毒株的HI试验抗原，若抗原性存在差异，则检测同一血清的HI抗体效价不同。
（8）鸭、鹅血清一般需进行非特异性凝集抑制素的处理，并以鸭阳性血清作为HI试验阳性对照血清。处理参考如下方法，可根据本实验室实际情况选择使用。
① 胰酶–加热–高碘酸盐法
A. 取0.3ml血清，加0.15ml胰酶溶液（8 mg/ml：200mg的P–250胰酶溶解于25ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中，混匀，过滤除菌，分装并在–15℃以下保存，保存期6个月），混匀后，在56℃水浴灭活30分钟后冷却至室温。
B. 再加入0.9ml高碘酸钾（将230mg的KIO4用0.01mol/L, PH 7.0–7.2的PBS，定容至100ml，过滤除菌后避光室温保存，保存期1周），混合，室温孵育15分钟。
C. 再加入0.9ml的丙三醇盐溶液（1ml的丙三醇加入到99ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中，混匀，过滤除菌，室温保存），混合，室温孵育15分钟。
D. 最后加入0.75ml生理盐水，混匀，置4℃保存备用。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
② 受体破坏酶（RDE）处理法
A. 取1体积血清（50μl），加4体积RDE（200μl），37℃水浴18小时（过夜）。
B. 再加入5体积（250μl）的1.5%浓度的柠檬酸钠，混匀，置56℃水浴30分钟（以破坏残余的RDE活性）。
C. 将1体积的50%的红细胞加入到10体积RDE处理的血清中（50μl红细胞+500μl血清），震荡混匀后4℃放置1小时，期间可轻轻摇匀悬浮红细胞数次。
D. 然后1000g离心10分钟，小心吸取上层上清，用于检测。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
【规格】 （1）1ml/瓶 （2）2ml/瓶
【包装】
【贮藏与有效期】 −15℃以下保存，有效期为24个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅供兽医诊断使用
4、禽流感病毒H5亚型（H5–Re14株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书
【兽药名称】
通用名 禽流感病毒H5亚型（H5–Re14株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
商品名 无
英文名 Avian Influenza Virus（H5 Subtype, Strain H5–Re14）Hemagglutination Inhibition Test Antigen, Positive Sera and Negative Sera
汉语拼音 Qinliuganbingdu H5 Yaxing （H5–Re14 zhu）Xueningyizhishiyan Kangyuan,Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
【主要成分与含量】 抗原为灭活的H5亚型禽流感病毒（H5–Re14株），血凝（HA）效价不低于1∶128。测定鸡血清时，分别使用禽流感病毒H5亚型（H5–Re14株）鸡阳性血清和禽流感病毒HI试验鸡阴性血清作为对照血清，阳性血清血凝抑制（HI）抗体效价不低于1∶128，阴性血清HI抗体效价不高于1∶4。测定鸭和鹅血清时，分别使用禽流感病毒H5亚型（H5–Re14株）鸭阳性血清和禽流感病毒HI试验鸭阴性血清作为对照血清，处理后的鸭阳性血清HI抗体效价不低于1∶80，阴性血清HI抗体效价低于1∶10。
【性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块；阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易于与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于HI试验检测禽流感病毒H5亚型（H5–Re14株）抗体。
【用法与判定】
1 材料
1.1 96孔V型（90度）微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.0~7.2 0.01mol/L PBS 按照如下方法配制或购买商品化产品，PBS一经使用，于2℃～8℃保存不超过3周。PBS 配制方法：秤量NaCl 80g、KCl 2g 、十二水磷酸氢二钠 36.3g、磷酸二氢钾 2.4g，溶解于ddH2O中，并定容10L，用氢氧化钠或盐酸调pH至7.0~7.2，最后121℃灭菌30分钟或过滤后使用。
1.3 阿氏（Alsevers）液 称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2℃～8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液 采取2~4只 2~6月龄SPF鸡的血液，与等量阿氏液混合，然后用PBS（0.01mol/L，pH值7.0~7.2，下同）洗涤3~4次，每次以1500r/min离心5~10分钟，将沉积的红细胞用PBS配制成1%悬液。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签规格标注的量，用PBS溶解。
2 操作术式
2.1 血凝（HA）试验
2.1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原，反复抽打3～5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行2倍系列稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025ml弃去。
2.1.4 每孔加0.025ml PBS。
2.1.5 每孔加入0.025ml 1%（V/V）鸡红细胞悬液。
2.1.6 结果判定 将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，置室温20~30分钟或置2~8℃ 45~60分钟，当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时，将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌（100%凝集）的最高稀释倍数判为血凝效价。
2.2 血凝抑制（HI）试验（鸭、鹅血清，必要时需要进行前处理，参考方法见注意事项）
2.2.1 根据HA试验测定的效价，如果抗原凝集价测定结果为1∶1024（举例），4个血凝单位（即4 HAU）=1024/4=256（即1∶256）。取PBS 9.0ml，加抗原 1.0ml，即成1∶10稀释，将1∶10稀释液 1.0ml加入到 24.6 ml PBS中，使最终浓度为1∶256。
2.2.2 四个单位血凝单位检测 检查4 HAU的血凝价是否准确，应将配制的1∶256稀释液进行系列稀释，使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。然后，从每一稀释度中取0.025ml，加入PBS 0.025ml，再加入1%鸡红细胞悬液0.025ml，混匀。将血凝板置室温20~40分钟或置2~8℃ 40~60分钟，如果配制的抗原液为4 HAU，则1∶4稀释度将给出凝集终点；如果4 HAU高于4个单位，可能1∶5或1∶6为终点；如果较低，可能1∶2或1∶3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整，使工作液确为4 HAU。
2.2.3 第2～11孔加入0.025ml PBS，第12孔加入0.05ml PBS。
2.2.4 第1~2孔加入0.025ml血清，第2孔血清与PBS充分混匀后吸0.025ml于第3孔，依次2倍系列稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025ml弃去。
2.2.5 第1～11孔均加入0.025ml的4HAU抗原，在室温（20～25℃）下静置至少20分钟或2℃～8℃ 至少60分钟。
2.2.6 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温（20～25℃）下静置20～40分钟或2℃～8℃ 40～60分钟，对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI抗体效价。当阳性对照血清的HI抗体效价与已知抗体效价误差不超过1个滴度，鸡阴性对照血清抗体效价不高于1∶4（若用处理后的鸭阴性血清，则抗体效价应低于1∶10）时，试验方可成立。检测鸡血清时，被检血清HI抗体效价不高于1∶8判为阴性，不低于1∶16判为阳性；检测处理后的鸭和鹅血清时，被检血清HI抗体效价低于1∶10判为阴性，不低于1∶10判为阳性。
【注意事项】 （1）HA和HI试验影响因素甚多，应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。
（2）准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。
（3）用pH值7.0～7.2的PBS（0.01mol/L）作为稀释液。
（4）抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。
（5）准确配制4HAU抗原，使用前需进行滴定，滴定好的抗原应在2小时内用完。
（6）抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2℃～8℃保存不超过1个月。
（7）同一亚型不同毒株的HI试验抗原，若抗原性存在差异，则检测同一血清的HI抗体效价不同。
（8）鸭、鹅血清一般需进行非特异性凝集抑制素的处理，并以鸭阳性血清作为HI试验阳性对照血清。处理参考如下方法，可根据本实验室实际情况选择使用。
① 胰酶–加热–高碘酸盐法
A. 取0.3ml血清，加0.15ml胰酶溶液（8 mg/ml：200mg的P–250胰酶溶解于25ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中，混匀，过滤除菌，分装并在–15℃以下保存，保存期6个月），混匀后，在56℃水浴灭活30分钟后冷却至室温。
B. 再加入0.9ml高碘酸钾（将230mg的KIO4用0.01mol/L, PH 7.0–7.2的PBS，定容至100ml，过滤除菌后避光室温保存，保存期1周），混合，室温孵育15分钟。
C. 再加入0.9ml的丙三醇盐溶液（1ml的丙三醇加入到99ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中，混匀，过滤除菌，室温保存），混合，室温孵育15分钟。
D. 最后加入0.75ml生理盐水，混匀，置4℃保存备用。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
② 受体破坏酶（RDE）处理法
A. 取1体积血清（50μl），加4体积RDE（200μl），37℃水浴18小时（过夜）。
B. 再加入5体积（250μl）的1.5%浓度的柠檬酸钠，混匀，置56℃水浴30分钟（以破坏残余的RDE活性）。
C. 将1体积的50%的红细胞加入到10体积RDE处理的血清中（50μl红细胞+500μl血清），震荡混匀后4℃放置1小时，期间可轻轻摇匀悬浮红细胞数次。
D. 然后1000g离心10分钟，小心吸取上层上清，用于检测。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
【规格】 （1）1ml/瓶 （2）2ml/瓶
【包装】
【贮藏与有效期】 −15℃以下保存，有效期为24个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅供兽医诊断使用
5、禽流感病毒H7亚型（H7–Re4株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清说明书
【兽药名称】
通用名 禽流感病毒H7亚型（H7–Re4株）血凝抑制试验抗原、阳性血清与阴性血清
商品名 无
英文名 Avian Influenza Virus（H7 Subtype, Strain H7–Re4）Hemagglutination Inhibition Test Antigen, Positive Sera and Negative Sera
汉语拼音 Qinliuganbingdu H7 Yaxing （H7–Re4 zhu）Xueningyizhishiyan Kangyuan, Yangxingxueqing Yu Yinxingxueqing
【主要成分与含量】 抗原为灭活的H7亚型禽流感病毒（H7–Re4株），血凝（HA）效价不低于1∶128。测定鸡血清时，分别使用禽流感病毒H7亚型（H7–Re4株）鸡阳性血清和禽流感病毒HI试验鸡阴性血清作为对照血清，阳性血清血凝抑制（HI）抗体效价不低于1∶128，阴性血清HI抗体效价不高于1∶4。测定鸭和鹅血清时，分别使用禽流感病毒H7亚型（H7–Re4株）鸭阳性血清和禽流感病毒HI试验鸭阴性血清作为对照血清，处理后的鸭阳性血清HI抗体效价不低于1∶80，阴性血清HI抗体效价低于1∶10。
【性状】 抗原为白色或淡黄色海绵状疏松团块；阳性血清和阴性血清为微黄色或淡红色海绵状疏松团块。易于与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】 用于HI试验检测禽流感病毒H7亚型（H7–Re4株）抗体。
【用法与判定】
1 材料
1.1 96孔V型（90度）微量反应板、单道及多道微量移液器（配有吸头）、加样槽、吸管、烧杯等。
1.2 pH值7.0~7.2 0.01mol/L PBS 按照如下方法配制或购买商品化产品，PBS一经使用，于2℃～8℃保存不超过3周。PBS 配制方法：秤量NaCl 80g、KCl 2g 、十二水磷酸氢二钠 36.3g、磷酸二氢钾 2.4g，溶解于ddH2O中，并定容10L，用氢氧化钠或盐酸调pH至7.0~7.2，最后121℃灭菌30分钟或过滤后使用。
1.3 阿氏（Alsevers）液 称葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100ml，加热溶解后调pH值至6.1，69Kpa 15min高压灭菌，2℃～8℃保存备用。
1.4 1%鸡红细胞悬液 采取2~4只 2~6月龄SPF鸡的血液，与等量阿氏液混合，然后用PBS（0.01mol/L，pH值7.0~7.2，下同）洗涤3~4次，每次以1500r/min离心5~10分钟，将沉积的红细胞用PBS配制成1%悬液。
1.5 抗原溶解 冻干的抗原和血清均按瓶签规格标注的量，用PBS溶解。
2 操作术式
2.1 血凝（HA）试验
2.1.1 在V型微量反应板中，每孔加0.025ml PBS。
2.1.2 第l孔加0.025ml抗原，反复抽打3～5次混匀。
2.1.3 从第1孔吸取0.025ml抗原加入第2孔，混匀后吸取0.025ml加入第3孔，如此进行2倍系列稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025ml弃去。
2.1.4 每孔加0.025ml PBS。
2.1.5 每孔加入0.025ml 1%（V/V）鸡红细胞悬液。
2.1.6 结果判定 将反应板在振荡器上震荡1～2分钟或轻扣反应板混合反应物，置室温20~30分钟或置2~8℃ 45~60分钟，当对照孔的红细胞呈显著纽扣状时判定结果。判定时，将反应板倾斜60度，观察红细胞有无泪珠状流淌，完全无泪珠样流淌（100%凝集）的最高稀释倍数判为血凝效价。
2.2 血凝抑制（HI）试验
2.2.1 根据HA试验测定的效价，如果抗原凝集价测定结果为1∶1024（举例），4个血凝单位（即4 HAU）=1024/4=256（即1∶256）。取PBS 9.0ml，加抗原 1.0ml，即成1∶10稀释，将1∶10稀释液 1.0ml加入到 24.6 ml PBS中，使最终浓度为1∶256。
2.2.2 四个单位血凝单位检测 检查4 HAU的血凝价是否准确，应将配制的1∶256稀释液进行系列稀释，使最终稀释度为1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6和1∶7。然后，从每一稀释度中取0.025ml，加入PBS 0.025ml，再加入1%鸡红细胞悬液0.025ml，混匀。将血凝板置室温20~40分钟或置2~8℃ 40~60分钟，如果配制的抗原液为4 HAU，则1∶4稀释度将给出凝集终点；如果4 HAU高于4个单位，可能1∶5或1∶6为终点；如果较低，可能1∶2或1∶3为终点。应根据检验结果将抗原稀释度做适当调整，使工作液确为4 HAU。
2.2.3 第2～11孔加入0.025ml PBS，第12孔加入0.05ml PBS。
2.2.4 第1~2孔加入0.025ml血清，第2孔血清与PBS充分混匀后吸0.025ml于第3孔，依次2倍系列稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025ml弃去。
2.2.5 第1～11孔均加入0.025ml的4HAU抗原，在室温（20～25℃）下静置至少20分钟或2℃～8℃ 至少60分钟。
2.2.6 每孔加入0.025ml 1%（V/V）的鸡红细胞悬液，震荡混匀，在室温（20～25℃）下静置20～40分钟或2℃～8℃ 40～60分钟，对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。
3 结果判定 以完全抑制4 HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI抗体效价。当阳性对照血清的HI抗体效价与已知抗体效价误差不超过1个滴度，鸡阴性对照血清抗体效价不高于1∶4（若用处理后的鸭阴性血清，则抗体效价应低于1∶10）时，试验方可成立。检测鸡血清时，被检血清HI抗体效价不高于1∶8判为阴性，不低于1∶16判为阳性；检测处理后的鸭和鹅血清时，被检血清HI抗体效价低于1∶10判为阴性，不低于1∶10判为阳性。
【注意事项】 （1）HA和HI试验影响因素甚多，应严格控制试验条件。每加一试剂或样品后需更换吸头，同时应严格控制作用温度和时间。
（2）准确配制红细胞悬液，使用时应随时振摇。
（3）用pH值7.0～7.2的PBS（0.01mol/L）作为稀释液。
（4）抗原和阴、阳性血清若有污染，应废弃。
（5）准确配制4HAU抗原，使用前需进行滴定，滴定好的抗原应在2小时内用完。
（6）抗原和血清按规定保存。冻干试剂应按规定的体积用PBS溶解。溶解后2℃～8℃保存不超过1个月。
（7）同一亚型不同毒株的HI试验抗原，若抗原性存在差异，则检测同一血清的HI抗体效价不同。
（8）鸭、鹅血清一般需进行非特异性凝集抑制素的处理，并以鸭阳性血清作为HI试验阳性对照血清。处理参考如下方法，可根据本实验室实际情况选择使用。
① 胰酶–加热–高碘酸盐法
A. 取0.3ml血清，加0.15ml胰酶溶液（8 mg/ml：200mg的P–250胰酶溶解于25ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中，混匀，过滤除菌，分装并在–15℃以下保存，保存期6个月），混匀后，在56℃水浴灭活30分钟后冷却至室温。
B. 再加入0.9ml高碘酸钾（将230mg的KIO4用0.01mol/L, PH 7.0–7.2的PBS，定容至100ml，过滤除菌后避光室温保存，保存期1周），混合，室温孵育15分钟。
C. 再加入0.9ml的丙三醇盐溶液（1ml的丙三醇加入到99ml的0.01mol/L, pH值 7.0∼7.2的PBS中，混匀，过滤除菌，室温保存），混合，室温孵育15分钟。
D. 最后加入0.75ml生理盐水，混匀，置4℃保存备用。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
② 受体破坏酶（RDE）处理法
A. 取1体积血清（50μl），加4体积RDE（200μl），37℃水浴18小时（过夜）。
B. 再加入5体积（250μl）的1.5%浓度的柠檬酸钠，混匀，置56℃水浴30分钟（以破坏残余的RDE活性）。
C. 将1体积的50%的红细胞加入到10体积RDE处理的血清中（50μl红细胞+500μl血清），震荡混匀后4℃放置1小时，期间可轻轻摇匀悬浮红细胞数次。
D. 然后1000g离心10分钟，小心吸取上层上清，用于检测。处理后的血清最终为10倍稀释的血清。
【规格】 （1）1ml/瓶 （2）2ml/瓶
【包装】
【贮藏与有效期】 −15℃以下保存，有效期为24个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅供兽医诊断使用
6、重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（细胞源，H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株）说明书
【兽药名称】
通用名 重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（细胞源，H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株+H7N9 H7–Re4株）
商品名 无
英文名 Reassortant Avian Influenza Virus（H5+H7）Trivalent Vaccine，Inactivated（Cell Source，H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14+H7N9 Strain H7–Re4）
汉语拼音 Chongzu Qinliugan Bingdu（H5+H7）Sanjia Miehuoyimiao（Xibaoyuan，H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu+H7N9 H7–Re4 Zhu）
【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的经MDCK细胞增殖的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株、H5N8亚型H5–Re14株和H7N9亚型H7–Re4株。灭活前其HA效价均为1∶512。
【性状】 乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支、2.3.4.4b分支和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力，鸡免疫期为6个月；鸭、鹅首免后3周，加强接种1次，免疫期为4个月。
【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2～5周龄鸡，每只0.3ml；5周龄以上鸡，每只0.5ml。2～5周龄鸭和鹅，每只0.5ml；5周龄以上鸭和鹅，每只1.0ml。
【不良反应】 一般无可见的不良反应。
【注意事项】 （1）禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。
（2）本品严禁冻结。
（3）本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象，切勿使用。
（4）使用前应将疫苗恢复至常温，并充分摇匀。
（5）接种时应使用灭菌器械，及时更换针头，最好1只禽1个针头。
（6）疫苗启封后，限当日用完。
（7）屠宰前28日内禁止使用。
（8）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】
【包装】
【贮藏与有效期】 2℃～8℃保存，有效期为12个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅在兽医指导下使用
7、重组禽流感病毒（H5亚型）二价灭活疫苗（细胞源，H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株）说明书
【兽药名称】
通用名 重组禽流感病毒（H5亚型）二价灭活疫苗（细胞源，H5N6 H5–Re13株+H5N8 H5–Re14株）
商品名 无
英文名 Reassortant Avian Influenza Virus （H5 Subtype） Bivalent Vaccine，Inactivated（Cell Source，H5N6 Strain H5–Re13+H5N8 Strain H5–Re14）
汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu （H5 Yaxing） Erjia Miehuoyimiao （Xibaoyuan，H5N6 H5–Re13 Zhu+H5N8 H5–Re14 Zhu）
【主要成分与含量】 疫苗中含灭活的经MDCK细胞增殖的重组禽流感病毒H5N6亚型H5–Re13株和H5N8亚型H5–Re14株，灭活前HA效价均为1∶256。
【性状】 乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4h分支和2.3.4.4b分支禽流感病毒引起的禽流感。接种后14日产生免疫力，鸡免疫期为6个月；鸭、鹅首免后3周，加强接种1次，免疫期为4个月。
【用法与用量】 胸部肌肉或颈部皮下注射。2～5周龄鸡，每只0.3ml；5周龄以上鸡，每只0.5ml。2～5周龄鸭和鹅，每只0.5ml；5周龄以上鸭和鹅，每只1.0ml。
【不良反应】 一般无可见的不良反应。
【注意事项】 （1）禽流感病毒感染禽或健康状况异常的禽切忌使用本品。
（2）本品严禁冻结。
（3）本品若出现破损、异物或破乳分层等异常现象，切勿使用。
（4）使用前应将疫苗恢复至常温，并充分摇匀。
（5）接种时应使用灭菌器械，及时更换针头，最好1只禽1个针头。
（6）疫苗启封后，限当日用完。
（7）屠宰前28日内禁止使用。
（8）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
【规格】
【包装】
【贮藏与有效期】 2℃～8℃保存，有效期为12个月。
【批准文号】
【生产企业】
仅在兽医指导下使用
8、重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N2 rHN5801株+rGD59株，H7N9 rHN7903株）说明书
【兽药名称】
通用名 重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N2 rHN5801株+ rGD59株，H7N9 rHN7903株）
英文名 Reassortant Avian Influenza Virus（H5+H7） Trivalent Vaccine，Inactivated（H5N2 Strain rHN5801+ Strain rGD59，H7N9 Strain rHN7903）
汉语拼音 Chongzu Qinliuganbingdu （H5+H7） Sanjia Miehuoyimiao（H5N2 rHN5801 Zhu + rGD59 Zhu，H7N9 rHN7903 Zhu）
【主要成分与含量】 疫苗中含有灭活的H5N2亚型重组禽流感病毒rHN5801株、rGD59株和H7N9亚型重组禽流感病毒rHN7903株。灭活后H5亚型rHN5801株和rGD59株鸡胚液HA效价为1∶512，H7N9亚型rHN7903株鸡胚液HA效价为1∶512。
【性状】 乳白色均匀乳剂。
【作用与用途】 用于预防由H5亚型2.3.4.4b分支、2.3.4.4h分支和H7亚型禽流感病毒引起的禽流感。免疫后14日产生免疫力，对雏鸡、雏鸭和雏鹅一次免疫的持续期为2个月。
【用法与用量】 颈后背部皮下或肌肉注射。2～5周龄鸡，每只0.3ml；5周龄以上鸡，每只0.5ml；5周龄以内雏鸭、雏鹅，每只0.5ml；5周龄以上鸭、鹅，每只1.0ml；种鸡、种鸭、种鹅，建议开产前加强免疫2次。
【注意事项】 （1）本品不能冻结保存。
（2）疫苗使用前应充分摇匀，并使疫苗升至室温。
（3）如果疫苗出现明显的水、油分层，应废弃不予使用。疫苗久置，在表面有少量白油，经振荡混匀后不影响使用。
（4）接种后一般无明显不良反应，有的在接种后1～2日内可能有减食现象。
（5）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。
（6）上市前28日内禁止使用。
【贮藏与有效期】 2℃～8℃保存，有效期为12个月。
瑞普生物2022年2月22日发布公告介绍，当前我国流行的 H5Nx 亚型高致病性禽流感依然保持多血清亚型、多基因型、多致病型毒株并存的特点，感染宿主范围广泛，优势流行病毒为 H5N8 亚型
（Clade 2.3.4.4b）及 H5N6 亚型（Clade 2.3.4.4h）禽流感病毒；2021 年以来，H7Nx亚型禽流感病毒出现明显的抗原变异，并迅速蔓延到全国多地，给疫病防控带来新的挑战。
“重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N2 rHN5803 株+rGD59 株，H7N9 rHN7903 株）”作为“重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗（H5N2 rSD57株+rFJ56 株，H7N9 rLN79 株）（禽元+）”的全新升级产品，采用针对当前流行H5N8 亚型、H5N6 亚型及 H7N9 亚型禽流感病毒的代表毒株作为基因供体，利用具有自主知识产权的 D7 株反向遗传技术平台拯救获得全新疫苗种毒 rHN5801株、rGD59 株和 rHN7903 株，结合先进的疫苗生产工艺制备而成。
本产品对目前流行的 H5N8 亚型（Clade 2.3.4.4b）和 H5N6 亚型（Clade 2.3.4.4h）高致病性禽流感病毒以及 H7N9 亚型禽流感病毒流行毒株均具有良好的免疫保护效果，是国内针对禽流感病毒多亚型、多基因型毒株的三价灭活疫苗之一，可实现针对包括水禽、家禽等多种靶动物的全覆盖免疫保护，疫苗覆盖性广、抗原匹配性高，能够有效防控当前 H5、H7 亚型高致病性禽流感的发生。
来源：大畜牧综合农业农村部和企业公告
