一、禽腺病毒的临床症状和病理变化
1、包涵体肝炎
包涵体肝炎(IBH)存在于大部分血清的临床症状中,接种病毒至雏鸡体内可以在其肝脏细胞内检测到嗜碱性包涵体,传染性法氏囊病(IBD)因为其能造成严重的免疫抑制,所以能助于禽腺病毒发生 IBH 。同样的,鸡群在生长中如果同时存在鸡传染性贫血病毒(CIAV)和白血病病毒(ALV)的时候,也可以造成包涵体肝炎的发生率和死亡率的增加。
IBH 最初表现为 3-5 内发生死亡高峰,一般第五天会停止(偶尔持续 2-3 周),死亡率在发病鸡群中达到 10%或者更高,病鸡一旦出现症状很快便会死亡,所以一般无明显症状。只能见到病鸡精神沉郁,羽毛杂乱,冠部和面部皮肤发白,发育不良,剖检常见病理变化为肝炎,肝肿大,肝的质地脆易碎,颜色苍白,有出血点,骨骼肌能看到明显的出血点,肾脏也会发生一定程度的肿大。在肝细胞中能观察到大量圆形或者不规则形状周边有明显苍白晕的嗜碱性和嗜酸性包涵体。
2、 心包积水综合征
禽腺病毒引起的心包积水综合征最早是在 1987 年的巴基斯坦肉鸡中发现,随后陆续在全球禽类中发生。我国发病的心包积水综合征主要发生在地方品种鸡、白羽肉鸡和三黄鸡死亡率较高,发生在蛋鸡和种鸡的死亡率较低。主要表现为心包积水和肝炎。病理变化可见病鸡心包内有淡黄色,清亮的液体,肺部伴有水肿,肝脏发生肿胀和变色,肝细胞肿胀,水泡变性,细胞核内部有两种包涵体,肾脏发生肿大并且肾小管发生扩张。多发性局灶性坏死的现象会发生在心脏和肝脏上,通常都伴有单核细胞浸润。
3 、肌胃糜烂症
日本曾经报道过禽腺病毒引起的肉鸡肌胃糜烂症,大部分都是禽腺病毒血清 1 型的,自然发生时,没有任何的临床症状,仅可以造成幼龄肉鸡的死亡,肌胃扩张,其内部有出血性液体,同时鯌林层内会发生黑色的糜烂斑,人工攻毒实验发现,还能造成胰腺炎,胆管炎,肝炎和胆囊炎。有可能病毒还能感染多种消化道并扩散。病理变化为局灶性胰腺炎和肌胃糜烂,腺上皮细胞的核内包涵体含有腺病毒的抗原,坏死的胰腺炎腺泡细胞中也能发现核内包涵体的存在。
4 、呼吸道疾病
禽类发生呼吸道疾病的时候,经常能从其上下呼吸道分离出Ⅰ亚群腺病毒,禽腺病毒不一定是呼吸道疾病的原发性病原体,但是在支原体病和传染性支气管炎的存下后,禽腺病毒可以加重呼吸道的疾病,自然爆发可以用肉眼观察到轻度或者中度的卡他性气管炎。呼吸道中有大量黏性分泌物,肺会出血,气囊会发生云雾状浑浊,出血点也会出现在咽喉处。
二、禽腺病毒的诊断
1、禽腺病毒分离与鉴定
禽腺病毒的分离和鉴定可以选择鸡上受病毒侵害的器官,比如咽、肾、发生包涵体肝炎的肝脏还有心包积水里的液体和粪便等。将所收集样品制作出 10%悬液,禽腺病毒可以直接接种鸡胚,也可以接种细胞,比如鸡胚干细胞和肌肾细胞,但是接种鸡胚成纤维细胞一般不敏感,需要经过两到三次的盲传,每次需培养 7 天。
如果从中分离得到腺病毒,之后确定禽腺病毒方法可以用用荧光抗体染色法检查,也可以直接电镜观察。还能用苏木素—伊红染色,若发现核内有嗜碱性包涵体即为分离到阳性病毒。若要进一步确定血清型的话,需要进一步采取病毒中和试验确定。
2、血清学检查
酶联免疫吸附试验(ELISA)可以用来检查群特异性抗体,是一种廉价敏感的方法,任何的腺病毒血清学试验主要问题是如何解释与分析其结果,因为这种抗体广泛分布于健康禽和病禽中,很多禽类受过各种血清型腺病毒的感染,抗体的存在也不能代表粘膜表面的局部免疫状态。双向免疫扩散(DID)试验可以检测针对群特异性抗原的抗体,该方法对自然感染的病例十分敏感,以至于用来检测 SPF 感染情况便显得不那么可靠,不过使用组合三个血清型腺病毒的三价抗原能增加其敏感度,间接荧光试验也是一种敏感、经济和快速的方法,但是需要操作者熟练掌握才能解释试验结果,目前还有间接免疫荧光的方法检测禽腺病毒血清 4 型。
3 、分子生物学检测
PCR 技术作为近几年兴起的一项分子生物学技术,因其操作方便,结果准确,特异性高等优点广泛应用于实验室检测,根据感染病鸡的样品,进行 DNA 的提取之后,再利用 PCR 特异性扩增 DNA 片段,目前已经大量建立了相对应的 PCR 的方法对腺病毒进行检测,并且扩增了相关片段之后,之后采取限制性内切酶技术对扩增片段进行酶切后就可检测和区分所有 12 个血清型的 FAd V 参考毒株。
但是普通 PCR的缺点在于只能够定性的判定腺病毒的存在与否,不能够定量的腺病毒病毒载量水平,荧光定量 PCR 便解决了这个问题,还使得灵敏度增加了 10 倍以上,目前主要有染料法 SYBRGreen 和探针法 Taq Man 法。随着科学技术的发展,一些新兴技术的发展,微滴式数字 PCR 技术的发明为家禽疾病的检测提供了一种更为准确的定量检测方法,其中也建立了 FAd V 的相关方法,虽然其定量结果非常准确且十分稳定,但是由于其机器和试剂昂贵并不能做大规模的检测。
三、预防和控制措施
1、预防措施
由于 IBDV 和 CIAV 都能增强禽腺病毒的致病性,所以,首先必须要控制和消灭这两种病毒。禽腺病毒具有很强的抵抗力,虽然对于那些不漏水,不透气并且密封的可控制环境的饲养环境中的禽腺病毒能做到完全消灭,但是商品代鸡的生存环境复杂,不同养殖场的条件设施的差异要做到完全的消灭还是很难做到的,并且禽腺病毒作为垂直传播病毒,传给下一代鸡群是肯定的是,并且水平传播也是一个很大的问题,从传染源头来说控制疾病是非常困难的。
2 、免疫接种
大量的证据表明,一些基因型的病毒可能是原发病原,所以要采取免疫预防接种。
母源抗体效价为 1:64 或者更高可以预防 IBH,但是可能会抑制禽类的生长。目前,巴基斯坦地区已经广泛的使用感染禽的肝脏匀浆制备的灭活疫苗。这对于 HPS 具有很好的预防作用。
更有研究表明,给肉用种鸡接种 CIAV 和 FAd V-4 两种疫苗后,对其子代进行实验性攻毒试验,结果显示,其子代对心包积水综合征的保护力大大提高,如果只使用其中一种疫苗,则保护效力会减少,这同时也说明了,管控免疫抑制性疾病十分重要,尤其是对腺病毒来说。
研究表明 FAd V-1(CELO)基因组具有插入外源 DNA 序列的能力,这对于禽腺病毒疫苗的研究具有重大突破,可以作为一种疫苗载体来用,并且将 IBDV 序列插入 CELO 病毒上时可以表达加工 IBDV 蛋白,这也说明了 CELO 病毒可以作为疫苗的转载工具或者生产重组蛋白载体的可能性。
来源:中国畜牧业协会禽业分会